Tal día como hoy, 1 de mayo de 1539, fallecía en la localidad de Toledo la Reina de España y emperatriz de Alemania, Isabel de Portugal.
Nieta de los Reyes Católicos e hija del Rey Manuel I de Portugal, Isabel de Portugal fue destinada a ser la mujer más poderosa de su época. En 1526, fue llevada a Sevilla para contraer matrimonio, con su primo hermano el Rey Carlos I de España y V de Alemania, también nieto de los Reyes Católicos.
Fue educada bajo la supervisión de su institutriz Elvira de Mendoza. Estudió matemáticas, textos de los clásicos del Renacimiento, las lenguas latina, española y francesa -su idioma materno era el portugués-, etiqueta y doctrina cristiana.
Isabel de Portugal y sus hermanos, eran castigados por su madre, cuando lo merecían, sin perdonar a ninguno. A los 14 años murió su madre y ella y su hermana Beatriz ,heredaron sus propiedades, además de las rentas de Viseu y Torres Vedras.
La nobleza castellana, aprobó su matrimonio con el Rey Carlos I de España y V de Alemania dada su condición de castellana, al ser nieta de la Reina Isabel "la Católica". Su boda con su primo hermano Carlos, supuso la continuación de las relaciones matrimoniales, entre las Coronas española y portuguesa.
Debido a las múltiples ocupaciones del Rey Carlos I de España y V de Alemania, desde 1529 hasta la fecha de su muerte, Isabel de Portugal se hizo cargo con éxito del gobierno de los reinos de la Península Ibérica, durante las ausencias del emperador.
Ejerció como regente de Castilla y de Aragón en dos periodos, desde el año 1529 hasta 1533 y desde 1535 hasta 1536 e intervino en acuerdos, como el tratado con Portugal sobre las Molucas, o la paz de Cambray.
En 1527 nació su primer hijo, el futuro Felipe II, en cuya persona la Corona de España se uniría a la de Portugal, un objetivo de los Reinos hispánicos, desde el reinado de los Reyes Católicos. Su segundo hijo, Juan, falleció en el mismo año de su nacimiento. Su hija María contrajo matrimonio con el emperador Maximiliano II, y su hija Juana, fue esposa del Príncipe Juan de Portugal y madre del futuro Sebastián I de Portugal.
Según lo acordado por los nobles, sus hijos se criaron en España. Ella supervisó su educación y les enseñó portugués. Escribía a su marido con regularidad, pero a menudo pasaba meses sin recibir cartas.
Tal y como Carlos había planeado, nombró a Isabel regente de España, durante su ausencia de la península, para que dirigiera sus campañas militares y atendiera la administración de sus otros reinos, entre 1529-1533 y 1537-1539.
Asistió a las reuniones de los consejos de gobierno y consultó a los ministros. Con el paso del tiempo, adoptó un papel más activo en el proceso de elaboración de políticas, sugiriendo sus propias soluciones, en lugar de limitarse a aceptar recomendaciones. Su marido consideraba sus deliberaciones "muy prudentes y bien pensadas"
Durante varios años, Isabel y la corte viajaron de ciudad en ciudad, en parte para evitar la exposición a epidemias. Se especula con que padecía tisis, y un contemporáneo la describe así:"La emperatriz es la mayor lástima del mundo, está tan delgada que no parece una persona".
En 1539 se quedó embarazada por séptima vez, pero en el tercer mes, contrajo otra fiebre que le causó complicaciones prenatales y dio a luz a un niño muerto. Murió dos semanas después, el 1 de mayo de 1539, a la edad de 35 años..